Mecanismo de acción no-genómico del 1,25-dihidroxi-vitamina D3 en corazón : estudios en cultivos primarios de miocitos y en músculo cardíaco diferenciado de pollo

Graciela Edith Santillán.

1998.

139 h. : ilustraciones ; 30 cm.

Tesis Doctor en Bioquímica.

Director de tesis: Ricardo Leopoldo Boland.

Tesis (doctoral)--Universidad Nacional del Sur. Departamento de Biología, Bioquímica y Farmacia, 1998.

Resumen: El trabajo de tesis está relacionado con el mecanismo de acción no-genómico de la hormona secoesteroidea 1alfa,25-dihidroxi-vitamina D3 [1,25(OH)2 D3; calcitriol] en músculo cardíaco. Como modelos experimentales se utilizaron cultivos de miocitos de corazón de embrión de pollo y preparaciones de músculo cardíaco diferenciado de pollos bajo un status nutricional normal de vitamina D. Los estudios realizados indican que el 1,25(OH)2 D3 incrementa rápidamente (< 1 min) los niveles de Ca²+ intracelular en células cardíacas a través de la activación de canales de calcio farmacológicamente caracterizados como de tipo L. El análogo sintético calcipotriol (MC 903), modificado estructuralmente en la cadena lateral, activó la vía de influjo de Ca²+ sensible a dihidropiridinas con mayor potencia que la hormona natural. El activador de proteínas G, AIF4-, similarmente al 1,25(OH)2 D3, estimuló el infjulo de Ca²+, mientras que el análogo no hidrolizable GDPßS suprimió los efectos de la hormona. El tratamiento combinado con AIF4- y 1,25(OH)2 D3 no resultó más efectivo que cada uno de estos agentes por separado. El empleo de las toxinas colérica y pertussis ± 1,25(OH)2 D3 y experimentos de ADP ribosilación de proteínas involucraron una proteína Gs en la estimulación de la entrada de Ca²+ en células cardíacas por la hormona. El agonista ß adrenérgico isoproterenol y el análogo SpcAMPS (agonista de AMP cíclico) incrementaron igual que el 1,25(OH)2 D3 el influjo de Ca²+ y el Ca²+ intracelular, sin ser tampoco estos efectos aditivos con los del esterol. De acuerdo con estas observaciones, el 1,25(OH)2 D3 estimuló rápidamente en ambos sistemas experiemntales la producción de AMPc y la fosforilación de proteínas de membranas microsomales. El cambio más prominente en fosforilación estuvo asociado a una proteína de membrana de músculo cardíaco diferenciado de masa molecular relativa de 45 KDa y punto isoeléctrico 5,65-6,1. La acción del 1,25(OH)2 D3 fué reproducida por el isoproterenol, la subunidad catalítica de PKA purificada y Sp-cAMP, y bloqueada por Rp-cAMPS (antagonista de AMPc) y el péptido inhibidor PKI, indicando que PKA media los efectos de la hormona sobre la fosforilación de proteínas. Esta interpretación fué confirmada por el aumento en actividad PKA detectado en respuesta al 1,25(OH)2 D3; el esterol no modificó la actividad PKC excluyéndose la participación de esta quinasa. La estimulación de la fosforilación de proteínas pudo ser observada por exposición directa de microsomas al 1,25(OH)2 D3, lo cual es compatible con una acción a nivel de membrana de la hormona. Los resultados en su conjunto indican que la estimulación de una proteína Gs seguida de un incremento en la producción de AMPc, actividad PKA y fosforilación de proteínas de membrana representan eventos secuenciales claves en la modulación de canales de calcio cardíacos por el 1,25(OH)2 D3. Estas investigaciones contribuyen al conocimiento del mecanismo de acción no-genómico del 1,25(OH)2 D3 en músculo cardíaco y de las bases moleculares de las cardiopatías asociadas al déficit de la hormona (deficiencia nutricional de vitamina D y enfermedades renales). CALIFICACION DEPARTAMENTO DE GRADUADOS Calificación de la defensa oral: Sobresaliente - 10 (diez) Fecha: 23/3/98

Incluye referencias bibliográficas (p. 117-138).