Clonado y estudio de la expresión de una proteína ligadora de calcio (Calbindina D-9K) inducida por 1,25-dihidroxi-vitamina D3 en aves

Susana B. Zanello.

1993.

155 h. : ilus. ; 27,5 cm.

Tesis--Universidad Nacional del Sur, 1994.

Resumen: Calbindina D-9K es una proteína ligadora del calcio (CaBP) perteneciente a la familia de las proteínas con dominio "EF-Hand" que ligan calcio en un "loop" delimitado por una hélice a cada lado. Es mayoritaria en intestino de mamíferos pero también se expresa en otros tejidos. Sin embargo, se ha asumido por mucho tiempo que es exclusiva de dicho grupo de vertebrados. El 1,25-dihidroxi-vitamina D3 ( 1,25 (OH)2 D3 ) es una hormona esteroidal que actúa modulando la expresión génica por un mecanismo nuclear mediado por receptor. La expresión del gen de Calbindina D-9K en mamíferos está regulada por esta hormona. En este trabajo se exponen las evidencias obtenidas a favor de la existencia del gen Calbindina D9-K en aves y de su expresión en músculo y duodeno de pollo. Se llevó a cabo la detección del mRNA para la proteína por combinación de transcripción reversa y amplificación por PCR (reacción de la polimerasa en cadena). Se clonó y secuenció un fragmento de cDNA-9K amplificado de 150 bp; la secuencia permite asignar identidad entre las Calbindinas 9K de pollo y rata. Esto se vió corroborado por la identidad inmunológica observada en los análisis Western Blot. La proteína se expresaría en muy bajos niveles según lo sugerido por los experimentos de Northern Blot. Asimismo su expresión podría estar regulada por el 1,25 (OH)2 D3 teniendo en cuenta que la proteína está modulada por la hormona en intestino de mamíferos. En favor de esto, se constató la presencia de receptor para 1,25 (OH)2 D3 (VDR) en tejidos de pollo donde se expresa la Calbindina 9K. En células musculares embrionarias en cultivo se detectó el receptor por inmunocitoquímica y también se aseguró su expresión en músculo, duodeno e hígado por amplificación por RT/PCR de VDR-mRNA. En conjunto ambos genes, el de Calbindina D- 9K y el de VDR conforman un campo fértil de estudio en relación con los mecanismos moleculares de acción genómica del 1,25 (OH)2 D3. Calificación de la defensa oral: Sobresaliente - Fecha: 20/5/1994

Incluye referencias bibliográficas.