Obtención de haploides para su utilización en planes de mejoramiento de trigo (Triticum aestivum L.)

Guillermo Aldao Humble.

2000.

96 h. : ilustraciones col. ; 30 cm.

"Tesis de Magíster en Ciencias Agrarias".

Director de tesis: Viviana Echenique y co-director: Rubén Miranda.

Tesis (magíster)--Universidad Nacional del Sur. Departamento de Agronomía, 2000.

Resumen: El objetivo general de esta tesis fue estudiar la posibilidad de adaptar una metodología de producción de plantas haploides de trigo (Triticum aestivum L.) a las condiciones locales de los programas de mejoramiento. Para esto, se trabajó con las técnicas de cultivo de anteras y de cruzamientos interespecíficos de trigo x maíz (Zea mays L.) El cultivo de anteras se realizó en dos oportunidades. El primer ciclo de cultivode anteras fue en contraestación y el segundo, durante la estación normal de crecimiento del trigo. Los genotipos utilizados comprendieron: filiales f3 y f1; líneas y cultivares regionales; Buck Ombú; Seri 82 y Sonora 64. Se aplicaron dos tipos de pretratamientos térmicos para desencadenar la embriogénesis: 1)frío, almacenando las espigas por 4-15 días a 4 °C previos al cultivo in vitro; o 2)calor, incubando las anteras a 32 °C durante los primeros 8 días de la fase de inducción. Las anteras a cultivar fueron clasificadas según el estadio de sus microsporas, en uno de los tres niveles dentro del estadio uninucleado: temprano, medio y tardío. Se utilizaron cuatro medios de cultivo para la fase de inducción: 1)P4 líquido; 2)W14mal; 3)MN6mal y 4)P4 sólido. Los tres primeros fueron líquidos, con maltosa como fuente de carbono y Ficoll-400 al 10 . El cuarto medio llevó sacarosa y fue solidifado con agar. Ambos medios P4 contenían extracto de papa al 10 . Los medios fueron suplementados con 0,5 mg/l de cinetina y con ácido 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D) en concentraciones de 1,5 mg/l para los medios 1 y 3, y de 2 mg/l para los medios 2 y 4. La inducción se llevó a cabo en oscuridad y a 25 °C. Para la fase de regeneración de plantas se utilizó el medio 190-2 suplementado con 0,5 mg/l de ácido naftalenacético y 0,5 mg/l de cinetina, con un fotoperíodo de 16 horas de luz y a 26 °C. Los cruzamientos de trigo x maíz se realizaron en la estación normal de cultivo de trigo, sembrando en maíz dentro del invernáculo. Un día después de la polinización con maíz, se inyectó una solución de 10 mg/l de 2,4-D en el entrenudo inmediato inferior a la espiga de trigo y en las flores procesadas. a los 14 - 17 días se rescataron los embriones sobre el medio de cultivo de Gamborg suplementado con vitaminas B5, en oscuridad y a 25 °C, y con un fotoperíodo de 16 horas luego de la aparición del coleoptile. El primer ciclo de anteras produjo 4 callos a partir de 13.000 anteras cultivadas y ninguna planta, mientras que el segundo brindó 1.056 callos, 245 plantas verdes y 90 plantas albinas a partir de 15.360 anteras. El pretratamiento térmico de frío resultó ser el mejor, produciendo en promedio 9,93 callos por cada cien anteras cultivadas, que condujeron a la mayor proporción de plantas verdes (70 ), en comparación con lo que sucedió para el pretratamiento de calor. Los medios líquidos superaron ampliamente al P4 sólido. El medio MN6mal indujo la mayor cantidad de callos (18,96 callos/100 anteras) seguido por P4 líquido (9,15 callos/100 anteras). Pero la producción de plantas verdes por cada cien anteras fue similar para ambos (3,69 y 3,49, respectivamente) debido a una mayor proporción de albinas (29,9 ) en las plantas derivadas de MN6mal. La respuesta también varió en función del genotipo de 0 a 11,4 plantas verdes por cada cien anteras, y dentro de este rango, las mejores ocurrieron en Seri 82, 2103-2 y 2186-3. Por su parte, Buck Ombú, Cooperación Liquén, CB-113, 2103-2 y dos F1 produjeron exclusivamente plantas verdes. La respuesta general lograda, como promedio de los genotipos cultivados en los medios líquidos y con pretratamiento de frío, fue de 3,2 de plantas verdes por cada 100 anteras, lo que equivalle a 16 plantas verdes por día y por operario. Mientras que la eficiencia obtenida con los mejores genotipos y para el tratemiento que mejor resultó (MN6mal, pretratamiento con frío y microsporas en uninucleado medio) fue de 9,2 plantas verdes por cada cien anteras, que es igual a 46 plantas verdes por día y por operario. A través de los cruzamientos de trigo x maíz se obtuvieron 72 embriones de 1.560 flores procesadas. Todas las plantas regeneradas fueron verdes. No se detectaron diferencias debidas al genotipo. Y la eficiencia final fue de 22,5 plantas verdes por día y por operario. En conclusión, se sugieren a los cruzamientos de trigo x maíz cuando se requiera la obtención de haploides de trigo a partir de un rango amplio de genotipos; y al cultivo de anteras como alternativa más eficiente cuando se trabaje con genotipos con gran capacidad androgénica y se utilice el mejor tratamiento recomendado, y para condiciones similares a las descriptas en este trabajo CALIFICACION DEPARTAMENTO DE GRADUADOS Calificación de la defensa oral: Sobresaliente - 10 (diez) Fecha: 18/04/00

Incluye referencias bibliográficas.